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顯微標本制作技術(shù)是組織學(xué)、胚胎學(xué)、生理學(xué)及細胞學(xué)等學(xué)科研究觀察細胞、組織的生理、病理形態(tài)變化的一種主要方法。大多數(shù)的生物材料,在自然狀態(tài)下是不適合顯微觀察的,也無法看到其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在經(jīng)過固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)后就可把材料切成較薄的片,再用不同的染色方法就可以顯示不同細胞組織的形態(tài)及其中某些化學(xué)成份含量的變化,就可以在顯微鏡下清楚地看到其中不同的區(qū)域組分狀態(tài),切片也便于保存,所以是教學(xué)和科研中常用的方法。
顯微標本制作有許多不同的方法,一般可分為非切片法與切片法兩大類:非切片法有涂片、鋪片、壓片、磨片、整裝片等;切片法又包括石蠟切片法、火棉膠切片法、冰凍切片法等。
顯微標本制作技術(shù)雖是生物學(xué)中很基本的操作技術(shù),但由于生物材料的個體差異、化學(xué)試劑的多樣性,因此操作技術(shù)相當細致而復(fù)雜,方法也很多,每一步驟的失誤都可導(dǎo)致整體的失敗,因此需要耐心細致,不斷總結(jié)經(jīng)驗,才能得到較好的結(jié)果。
切片法是必須依靠手或切片機將組織切成薄片來進行觀察的方法。為了能清晰地觀察到動、植物的組織結(jié)構(gòu)及細胞形態(tài),必須先經(jīng)過一系列步驟將組織內(nèi)滲入某些支持物質(zhì),使組織變硬以利于切成薄片,根據(jù)所用支持劑的種類不同,可分為徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片法等類型,切成薄片后還需要去蠟,染色、脫水、透明等步驟,將其制成永久標本。
下邊以石蠟切片為例,介紹顯微標本制作方法。
修塊:切片前需修整蠟塊,即將包埋好的一大塊蠟塊切開,使每一小塊都含有一塊組織,并將這組織周圍的石蠟切除,將組織修成一小塊蠟塊并粘在大小適宜的硬木塊上,以便于固定在切片機上。
貼片:一手持毛筆,一手轉(zhuǎn)動切片機,切片的蠟片連成一長條蠟帶
切下的蠟帶放在一干凈黑紙上,用小刀根據(jù)需要切成數(shù)段,分別貼在干凈載玻片上。在恒溫展片臺上展平、烘干。
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